华中科技大学学报(医学版)

作者：熊焱强,冯晶,刘朝奇,李志英

单位：1三峡大学附属仁和医院妇产科,宜昌 4430012三峡大学肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室,宜昌 443002

关键词：人乳头瘤病毒16E7, miR-29a, CDK6, 细胞增殖,

基金：湖北省卫生健康委员会联合基金青年人才项目(No.WJ2019H556);宜昌市医疗卫生研究项目(No.A20-2-042)

摘要:目的 探究人乳头瘤病毒16E7(HPV16E7)通过调控细胞内 miR-29a表达促进细胞增殖的分子机制,从miRNA 的视角探讨高危型 HPV 的致癌机制。方法 将 HPV16E7基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(-),将重组质粒及空载质粒分别转 染 人 前 列 腺 癌 细 胞 PC3;通 过 半 定 量 RT-PCR 检 测 细 胞 周 期 相 关 基 因 及 miR-29a潜 在 靶 基 因CDK6、HBP1的表达水平,通过荧光素酶报告实验确定 miR-29a的靶基因;将 miR-29amimic及inhibitor分别瞬时转染PC3-E7和 PC3-3.1细胞,Westernblot检测 CDK6蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期分布。结果 与对照组相比,克隆细胞株 PC3-E7中 CDK4、CDK6、CyclinE2、E2F1等细胞周期相关调节因子及 miR-29a的潜在靶基因 HBP1、CDK6等表达均有不同程度的上调(均P<0.01);而 PC3-E7细胞中 CDK6蛋白表达水平亦明显高于对照组(P<0.01);miR-29a通过靶向3'-UTR区域调控 CDK6基因转录和蛋白表达,E7高表达后下调了 miR-29a的表达水平,使得 CDK6表达升高,而加速细胞周期 G1期向S期进展。上调 miR-29a后可以抑制 CDK6的表达,并调控下游细胞周期,部分逆转 E7的促增殖效应。结论 miR-29a与 CDK6mRNA3'UTR结合并下调其表达,从而抑制细胞的增殖,E7-miR-29a-CDK6信号通路可能是高危型 HPV 致细胞发生恶性增殖的重要途径。

来源：2021年第6期

《华中科技大学学报(医学版)》期刊编辑部

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