华中科技大学学报(医学版)

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• 5′tiRNA-His-GTG促进Smad3磷酸化加重心脏纤维化*

  蔡子阳,蔡煜炜,严江涛

  目的 本研究旨在探索心脏纤维化相关的转运RNA衍生小RNA(tsRNA),并探究其调控机制与临床相关性。方法 通过PANDORA-seq筛选心脏纤维化相关tsRNA,发现5′tiRNA-His-GTG表达显著上调。采用qRT-PCR、Western blot、CCK-8、EdU等方法评估5′tiRNA-His-GTG对心脏纤维化过程的影响。此外,通过RNA pulldown和RIP-qPCR探究5′tiRNA-His-GTG在TGF-β1/Smad3通路中的调控机制。检测临床病患血浆样本中5′tiRNA-His-GTG的表达水平,并使用多因素Logistic回归分析5′tiRNA-His-GTG是否构成冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAD)的独立危险因素。结果 过表达5′tiRNA-His-GTG促进心脏成纤维细胞的纤维化反应,增强TGF-β1/Smad3通路中Smad3的磷酸化进而激活下游纤维化相关基因COL1A1和ACTA2的转录和翻译。5′tiRNA-His-GTG与Smad3互相作用。5′tiRNA-His-GTG在CAD组血浆中的水平大约为对照组的4倍,并且5′tiRNA-His-GTG与CAD发病之间存在独立相关性。结论 5′tiRNA-His-GTG通过与Smad3相互作用促进Smad3磷酸化,进而调节心脏纤维化过程。

• 补肾滋阴固冲汤联合艾灸及耳穴压豆治疗肾阴虚型月经过多的作用机制:一项随机对照试验*

  董泳琪,阮前芳,黄晓桃,吴云霞

  目的 评估补肾滋阴固冲汤联合艾灸及耳穴压豆治疗肾阴虚型月经过多的临床疗效、安全性及作用机制。方法 采用随机对照试验,将138例肾阴虚型月经过多患者分为实验组(口服补肾滋阴固冲汤+艾灸隐白穴+耳穴压豆)和对照组(口服屈螺酮炔雌醇片Ⅱ),各69例干预3个月经周期。比较两组临床疗效、性激素(FSH、LH、E2、PRL、P、T)、血管生成因子(VEGF、ANG-1)、子宫内膜厚度及安全性指标。结果 实验组总有效率显著高于对照组(95.70% vs. 84.10%,P＜0.05)。实验组在降低FSH、LH、E2、P、VEGF、ANG-1水平,改善PBAC评分[(99.44±47.20)vs.(116.55±49.98)分]、减少子宫内膜厚度[(0.51±0.24)vs.(0.64±0.26)cm]及降低中医证候积分[(10.36±3.38)vs.(12.42±1.37)分]方面均优于对照组(均P＜0.05)。实验组不良反应发生率更低(5.8% vs.17.4%,P＝0.033)。结论 补肾滋阴固冲汤联合艾灸及耳穴压豆通过调节HPO轴功能、抑制病理性血管生成及修复子宫内膜结构,显著改善肾阴虚型月经过多,疗效优于单纯西药治疗,且安全性更佳。

• 瑞马唑仑调控Nrf2/HO-1信号通路对哮喘小鼠气道炎症的影响*

  张琼,张涛,李娜,吴志林

  目的 探讨瑞马唑仑对卵清蛋白(OVA)诱导的支气管哮喘小鼠气道炎症及氧化应激的作用及其可能机制。方法 将40只SPF级雄性BALB／c小鼠(6～8周龄,体重18～20 g),随机分为4组(n=10):对照组(Control组)、哮喘组(OVA组)、瑞马唑仑干预组(OVA+RMZL组)、地塞米松(DEX)干预组(OVA+DEX组)。采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发两个阶段建立哮喘小鼠模型。在每次激发前1 h,腹腔注射瑞马唑仑(10 mg／kg),Control组用PBS(pH 7.4)代替。肺功能仪检测小鼠气道压力;以HE染色和PAS染色检测各组小鼠肺组织病理变化和黏液分泌水平,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、IL-13及INF-γ和小鼠血清OVA特异性IgE浓度;以活性氧(SOD)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒检测各组小鼠肺组织MDA、SOD、GSH水平;RT-PCR法检测小鼠肺组织中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)及血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白表达水平和mRNA的表达水平。免疫组织化学检测小鼠肺组织中Nrf2核转移。结果 与Control组比较,哮喘模型组小鼠的气道压力、肺组织炎症和黏液分泌评分、BALF中Th2细胞因子(包括IL-4、IL-5、IL-13)及血浆中特异性IgE水平、ROS和MDA含量、Nrf2和HO-1的mRNA表达水平和Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平显著升高(均P<0.05),而Th1细胞因子(INF-γ)表达水平、SOD和GSH水平显著降低(均P<0.05);与OVA组比较,RMZL和DEX干预组小鼠的气道压力、肺组织炎症和黏液分泌评分、肺泡灌洗液BALF中Th2细胞因子(包括IL-4、IL-5、IL-13)及血浆中特异性IgE水平、ROS和MDA含量显著降低(均P<0.05),而Th1细胞因子(INF-γ)表达水平、SOD和GSH水平、Nrf2和HO-1的mRNA表达水平和Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05)。结论 瑞马唑仑能够减轻哮喘小鼠气道炎症,改善哮喘小鼠肺组织氧化应激反应,其机制可能与瑞马唑仑增强Nrf2/HO-1信号通路有关。

• NRBP1在评估非小细胞肺癌患者预后中的价值及其调控G1/S期转变的相关机制*

  徐建群,黄波,郭红荣,周利君,程津津,方思,张娣,何成成,陈天佑

  目的 探讨核受体结合蛋白1(nuclear receptor-binding protein 1,NRBP1)评估非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者预后的价值并通过体外实验分析相关调控机制。方法 纳入2015年1月至2017年12月在武汉市第三医院接受手术治疗的67例NSCLC患者,免疫组织化学检测NRBP1在NSCLC肿瘤和癌旁组织中的表达水平并分析其与临床病理参数间的关系;Kaplan-Meier plotter数据库分析NRBP1和NSCLC患者预后的相关性。以siRNA敲减NRBP1在A549和95D细胞中的表达,应用CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞克隆实验检测克隆形成情况,流式细胞术分析细胞周期改变,qRT-PCR和Western blot分析NRBP1表达,Western blot分析A549细胞增殖与周期相关蛋白Ki-67,CDK4,Cyclin D1,P21的表达。结果 与癌旁组织相比,NRBP1在NSCLC肺癌组织中表达阳性率增加(P＜0.01),其高表达与TNM分期相关(P＜0.05)。与NRBP1高表达组相比,NRBP1低表达组生存期更长[HR=1.28(1.13~1.44),Log-rank P＜0.01]。下调NRBP1在A549和95D细胞中的表达,可以抑制细胞增殖和克隆形成,G1期细胞增加,S期减少,下调NRBP1在A549细胞表达可导致Ki-67,CDK4,cyclin D1表达减少,P21的表达增加。结论 NRBP1在NSCLC患者中的表达增加与患者预后不良相关,其可通过调节细胞周期G1/S期转变,参与NSCLC细胞增殖的调控。

• 乳腺癌可选择性多聚腺苷酸化及其相关因素系统分析*

  黄丽云,覃柳宇,蒋运,牛晓辉,杨健叶,龚静

  目的 旨在通过整合多组学和临床信息,全面分析乳腺癌(breast cancer,BRCA)中特异性可选择性多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation,APA)的变化及其预后价值,并深入挖掘相关的关键上下游调控因素。方法 整合来自TCGA和GTEx队列的多个组学数据集,以鉴定BRCA中失调的APA事件。进一步结合临床信息,并使用LASSO Cox回归分析,筛选与预后相关的APA事件。通过结合多元线性回归分析和LASSO回归分析,鉴定潜在调控预后APA事件的上游APA因子以及相关的体细胞突变。最后,基于miRNA-3′非翻译区(3′ untranslated regions,3′UTR)调控信息,分析APA伴随的下游miRNA结合位点的变化。结果 通过对BRCA中APA谱的分析,揭示了广泛的APA失调现象,这些失调APA事件中77.37%为转录本缩短,且主要影响了癌症和免疫过程。筛选出112个与BRCA预后相关的APA事件,并基于其中10个核心APA事件,构建了总生存期(overall survival,OS)预测特征。进一步的分析表明,SNRNP70和PABPN1是APA失调的关键调控因子。其中SNRNP70的下调可能导致APA介导的STARD10转录本缩短。此外,体细胞突变与BRCA中82.44%的失调APA事件相关,可以通过改变基因功能来影响APA。通过构建BRCA的APA-miRNA网络,进一步发现STARD10的3′UTR缩短使其表达能够逃避miR-325-3p的抑制。结论 研究发现了一系列与BRCA预后相关的APA事件及其关键上下游调控因素,研究结果将有助于APA调控机制的深入理解。

• 基于网络药理学和实验研究探讨仙鹤草治疗支气管哮喘的作用机制*

  高国财,郑宏,潘丹萍,白朝辉,韩雪

  目的 采用网络药理学和分子对接探讨仙鹤草治疗支气管哮喘(bronchial asthma,BA)的作用机制,并用动物实验予以验证。方法 基于TCMSP、OMIM、DisGenet、GeneCards等多种数据库,获得仙鹤草治疗BA的关键成分及核心靶点。应用String及Cytoscape构建作用靶点的PPI网络,筛选出核心作用靶点,并进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。采用4%卵清蛋白致敏建立BA大鼠模型,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-6和IFN-γ水平,Western blot法检测肺组织p38 MAPK、P-p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB P-p65蛋白表达水平,研究仙鹤草对BA大鼠的作用,验证相关靶点通路。结果 共获得仙鹤草活性成分5个,仙鹤草治疗BA的交集潜在作用靶点120个,炎症相关核心靶点5个,涉及159条信号通路。分子对接验证结果表明,槲皮素与炎症相关核心靶点结合稳定、亲和力良好。BA模型动物实验结果表明,仙鹤草可降低IL-4、IL-5、IL-6、IL-13细胞因子水平,升高IFN-γ水平,Western blot结果显示,仙鹤草可下调P-p38 MAPK、NF-κBP-p65水平。结论 仙鹤草可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,减少Th2细胞因子生成,减轻炎症反应,从而发挥对BA的治疗作用。

• 孕早期全身炎症水平与妊娠期糖尿病发病风险的关联研究*

  刘炳海,郭雯雯,颜莲妍,彭静,武丽,王友洁,张丽

  目的 探讨孕早期全身免疫炎症指数(systemic immune-inflammation index,SII)和全身炎症反应指数(systemic inflammation response index,SIRI)对妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)、GDM亚型及血糖水平的影响。方法 采用回顾性队列研究,从广东省妇幼保健院2015~2024年电子病历系统中抽取34171名孕妇作为研究对象。GDM及其亚型采用75 g口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)诊断。利用修正泊松回归模型、多分类Logistic回归模型及线性回归模型分析SII、SIRI与GDM、GDM亚型及血糖水平的关联,运用限制性立方样条模型探讨SII、SIRI与GDM及血糖水平可能的非线性关系。结果 调整协变量后,修正泊松回归模型结果显示自然对数转换的SII(RR=1.30,95%CI:1.23~1.37)和SIRI(RR=1.21,95%CI:1.16~1.27)升高与GDM发病风险增加相关。多分类Logistic回归模型结果显示自然对数转换的SII、SIRI升高与GDM中单纯负荷后高血糖亚型(SII: OR=1.36,95%CI: 1.26~1.47; SIRI: OR=1.27,95%CI:1.19~1.36)及混合高血糖亚型(SII:OR=1.82,95%CI: 1.49~2.21; SIRI:OR=1.47,95%CI: 1.25~1.73)发病风险增加相关,对单纯空腹高血糖亚型(SII:OR=1.22,95%CI: 0.99~1.51; SIRI:OR=1.09,95%CI: 0.92~1.30)发病风险的影响无统计学意义。限制性立方样条结果显示自然对数转换的SII与空腹血糖、负荷后1 h血糖水平呈J型剂量反应关系,与负荷后2 h血糖水平呈线性剂量反应关系;自然对数转换的SIRI与负荷后1、2 h血糖水平呈线性剂量反应关系。结论 孕早期SII、SIRI升高与GDM以及其单纯负荷后高血糖亚型和混合高血糖亚型发病风险增加显著相关,研究结果可为GDM的早期风险识别与亚型针对性管理提供新的炎症标志物。

• GPER通过激活AMPK-PDHA1/CPT1B通路改善脓毒症肝细胞线粒体功能障碍的机制研究*

  杨镭镭,彭坚,冯小静,高珊,陈真

  目的 探讨G蛋白偶联雌激素受体(GPER)改善脓毒症患者肝细胞线粒体功能障碍的可能作用机制。方法 采用AML-12肝细胞构建内毒素(LPS)诱导的脓毒症模型,设空白对照组、LPS组、LPS+G1组(GPER激动剂)和LPS+G15组(GPER拮抗剂)。通过CCK-8、流式细胞术、ELISA等技术评估细胞活力、凋亡、炎症因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)及能量代谢指标(ATP/AMP)。采用qRT-PCR和Western blot分别检测GPER的mRNA和蛋白表达水平。采用Western blot分析AMPK磷酸化(p-AMPK)及其下游代谢酶丙酮酸脱氢酶E1α亚基(PDHA1)和肉碱棕榈酰转移酶1B(CPT1B)的蛋白表达。通过激光共聚焦显微镜和流式细胞术分别检测线粒体活性氧(mtROS)和线粒体膜电位(ΔΨm),并利用透射电镜观察线粒体超微结构。结果 在LPS诱导的肝细胞脓毒症模型中,GPER激动剂G1不仅能显著改善细胞活力、抑制凋亡并减轻炎症反应,还能有效逆转能量代谢障碍、降低氧化应激水平(均P<0.01),并修复线粒体超微结构损伤。相反,GPER拮抗剂G15不仅完全阻断了G1的保护作用,还进一步加剧了上述各项损伤指标(均P<0.01)。结论 GPER通过激活AMPK-PDHA1/CPT1B轴,优化糖脂代谢,恢复线粒体能量稳态并抑制氧化应激,从而减轻脓毒症肝细胞损伤,为脓毒症肝损伤的性别差异化治疗提供新靶点。

• 甘草次酸通过HIF-1α/BNIP3介导的线粒体自噬改善索拉非尼诱导的心肌细胞损伤及凋亡*

  张显林,王丽珍,张洁,张利芳

  目的 基于缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路,探究甘草次酸对索拉非尼诱导的心肌细胞损伤及凋亡的影响。方法 MTT检测筛选甘草次酸作用于大鼠心肌细胞H9c2的浓度,随后将实验分为Control组、索拉非尼组、索拉非尼+甘草次酸组、索拉非尼+甘草次酸+HIF-1α抑制剂YC-1组、索拉非尼+甘草次酸组+YC-1+自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)组。试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量、丙二醛(MDA)水平,荧光探针法测定细胞内总活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光法检测LC3蛋白的表达及BNIP3与LC3的细胞内共定位,Western blot检测线粒体自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin-1的表达,qRT-PCR及Western blot分别检测HIF-1α、BNIP3 mRNA及蛋白的表达水平。结果 相对于索拉非尼组,添加100、200 μmol/L甘草次酸处理的H9c2细胞活力显著提升(均P<0.05)。相对于Control组,索拉非尼组H9c2细胞的LDH释放量、MDA及ROS水平显著上调,细胞的凋亡率显著升高,细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白的表达水平明显降低,p62水平显著上调,细胞中LC3荧光强度减弱,LC3和BNIP3共定位荧光强度减弱,HIF-1α、BNIP3 mRNA及蛋白的表达显著下调(均P<0.05);相对于索拉非尼组,索拉非尼+甘草次酸组H9c2细胞的LDH释放量、MDA及ROS水平显著下调,细胞的凋亡率显著降低,细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白的表达水平显著上调,p62水平显著下调,细胞中LC3荧光强度增强,LC3和BNIP3共定位荧光强度增强,HIF-1α、BNIP3 mRNA及蛋白的表达显著上调(均P<0.05);YC-1能显著逆转以上指标(均P<0.05),RAPA能显著抑制YC-1的作用(均P<0.05)。结论 甘草次酸能够通过激活HIF-1α/BNIP3信号通路促进线粒体自噬抑制索拉非尼诱导的心肌细胞损伤及凋亡。

• 紫花前胡素通过miR-17-5p靶向PI3K/Akt通路对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响*

  吕九娣,彭昕,邢玉广,王俊杰,胡军红

  目的 探讨紫花前胡素(Decursin,DE)对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响及其具体机制。方法 选取SW480、HCoEpiC细胞进行实验,qRT-PCR法检测两种细胞系中miR-17-5p表达水平。CCK-8法检测不同DE浓度梯度(0、10、30、60和100 μmol/L)下SW480细胞增殖活性。qRT-PCR法检测SW480细胞中miR-17-5p(mimic/inhibitor)的转染效率,CCK-8法检测转染后细胞增殖活性,Transwell实验检测迁移细胞数。建立转染(mimic/inhibitor)组与转染(mimic/inhibitor)＋DE组SW480细胞,采用qRT-PCR法检测miR-17-5p表达量变化,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell实验检测迁移细胞数,Western blot法检测PIK3R1、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白表达量变化。双荧光素酶报告基因实验检测miR-17-5p与PI3K的靶向作用。结果 SW480细胞miR-17-5p表达水平高于HCoEpiC细胞(P＜0.05)。SW480细胞增殖活性随DE处理浓度的升高呈现浓度依赖性降低(P＜0.05);选择60 μmol/L DE用于后续实验。miR-17-5p mimic/inhibitor可显著升高/降低SW480细胞中miR-17-5p的表达量、细胞增殖活性和细胞迁移数(均P＜0.05)。加入DE后各组miR-17-5p表达量、细胞增殖活性、细胞迁移数以及p-PI3K和p-Akt蛋白表达量降低(均P＜0.05),PIK3R1蛋白表达量升高(P＜0.05),PI3K、Akt蛋白表达量无明显变化。共转染miR-17-5p与Wt-PIK3R1,荧光素酶相对活性随miR-17-5p表达量的升高/降低而降低/升高(均P＜0.05)。共转染miR-17-5p与Mut-PIK3R1,荧光素酶相对活性无显著变化(P＞0.05)。结论 DE可抑制结直肠癌细胞增殖和迁移,其机制可能是通过下调miR-17-5p从而促进PIK3R1表达,抑制PI3K/Akt通路发挥作用。