华中科技大学学报(医学版)

作者：高雨彤,肖娜,敖启林

单位：1华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科,武汉 4300222长江大学附属仙桃市第一人民医院病理科,仙桃 4330003华中科技大学同济医学院附属同济医院病理科,武汉 430030

关键词：非瑟酮,阿霉素,肺动脉内皮细胞,肺血管重塑,衰老,

基金：国家自然科学基金资助项目(No.81270105)

摘要:目的 探讨非瑟酮(Fisetin)对阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导的人肺动脉内皮细胞(HPAEC)衰老的影响及其相关机制。方法 使用不同浓度的 DOX(0.1、0.25、0.5、1μmol/L)诱导 HPAEC衰老,通过CCK8法检测细胞增殖活性,Westernblot法检测衰老相关蛋白 P53、P21表达。随后用不同浓度的 Fisetin作用于 HPAEC,分别于0、24、48和72h检测 Fisetin对 HPAEC 细胞增殖的影响,流式细胞术检测 Fisetin对细胞周期的影响,利用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)对衰老细胞进行染色并计数,活性氧(ROS)试剂盒检测 Fisetin对 HPAEC 活性氧(ROS)产生的影响,Westernblot法检测衰老相关蛋白、Nrf2和 MAPK 信号蛋白的表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测分泌的细胞因子浓度,CCK8法检测 Fisetin预处理的 HPAEC培养上清对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖的影响。结果 当 Fisetin浓度在20μmol/L以下时,HPAEC增殖活性在24、48、72h没有明显降低,差异无统计学意义(P>0.05);流式细胞术检测发现 DOX刺激后,90%以上的 HPAEC被阻滞在 DNA 合成前期(G0/G1期),而 Fisetin(5、10、20μmol/L)处理组细胞周期在 DNA 合成期(S期)分别占40%、50%及55%,呈浓度依赖性上升,差异具有统计学意义(P<0.01)。Westernblot证实 DOX刺激后,HPAEC中衰老相关蛋白 P21表达增加,而随着 Fisetin作用浓度的增加,P21表达逐渐下降(P<0.05)。SA-β-gal衰老染色和 ROS染色证实 DOX 干预后,衰老细胞的数量明显增加,ROS的产生量也增加;而 Fisetin处理后,衰老细胞的数量逐渐减少,ROS的产生量也减少。Fisetin可增加 HO-1、p-P38的表达,促进 Nrf2核转移,沉默HO-1和抑制p-P38表达均可减弱 Fisetin对 P21的抑制作用。DOX刺激后细胞衰老相关分泌表型(SASP)的细胞因子表达不断升高,而不同浓度的 Fisetin(5、10、20μmol/L)干预后,SASP细胞因子的表达量下降。CCK8实验证实,Fisetin预处理的 HPAEC培养上清对 HPASMC增殖有抑制作用。结论 Fisetin可通过 Nrf2/HO-1和 MAPK 信号通路抑制DOX诱导的 HPAEC衰老,并能够抑制 HPASMC增殖,从而抑制肺动脉重塑。

来源：2021年第6期

《华中科技大学学报(医学版)》期刊编辑部

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