华中科技大学学报(医学版)

作者：佘晓伟,孙黎,胡俊波,徐丰

单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院胃肠外科,武汉 430030

关键词：CRISPR/Cas9, MCT1, 乳酸, 细胞增殖,

基金：国家自然科学基金青年基金资助项目(No.82003123)

摘要:目的 利用 CRISPR/Cas9基因编辑技术在人结肠癌细胞系 RKO 中稳定敲除 MCT1基因,并检测其生物学功能。方法 将 CRISPRv2-MCT1-KO #1、CRISPRv2-MCT1-KO #2质粒转染至 RKO 细胞中,48h后用含嘌呤霉素的培养液进行筛选,挑取单克隆细胞;利用 Westernblot和DNA 测序技术检测 MCT1基因表达情况;利用免疫荧光技术检测 MCT1蛋白表达分布变化;通过乳酸试剂盒检测细胞内乳酸水平;通过细胞克隆形成实验以及 CCK-8实验检测细胞增殖能力;通过 GSEA 软件分析 MCT1基因在结肠癌中可能参与的信号通路。结果 CRISPRv2-MCT1-KO 质粒成功构建;Westernblot和 DNA 测序结果显示稳定敲除 MCT1基因的人结肠癌 RKO 细胞构建成功;与对照组相 比,MCT1基因敲除细胞的细胞膜上不能观察到 MCT1蛋白,且细胞内乳酸水平明显降低(P<0.01);MCT1基因敲除后RKO细胞增殖能力明显减弱(P<0.01);GSEA 分析显示,MCT1可能通过氧化磷酸化、MYC信号通路促进结肠癌发生发展。结论 通过 CRISPR/Cas9技术成功构建 MCT1基因稳定敲除的结肠癌 RKO 细胞系,可能成为研究 MCT1基因在结肠癌发生发展中作用的有效工具。

来源：2022年第1期

《华中科技大学学报(医学版)》期刊编辑部

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