华中科技大学学报(医学版)

作者：张秀森,刘书培,王海瑞,原翔

单位：河南科技大学临床医学院,河南科技大学第一附属医院,河南科技大学肿瘤研究所,河南省肿瘤表观遗传重点实验室,洛阳 471003

关键词：食管鳞癌, 牙龈卟啉单胞菌, xCT, 鞭毛蛋白, 谷氨酰胺代谢,

基金：国家自然科学基金资助项目(No.82073029)

摘要:目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,Pg)通过膜受体分子-溶质运载蛋白7家族成员11(solutecartierfamily7member11,SLC7A11,又称xCT)调节食管鳞癌细胞谷氨酰胺代谢的作用及机制。方法 基于人类全基因组库筛选 Pg感染食管鳞癌细胞所需的宿主因子;运用免疫共沉淀、NanoBiT???? 活细胞实时蛋白相互作用和免疫荧光实验探索 Pg的主要毒力因子鞭毛蛋白(fimbriae,FimA)和宿主细胞受体分子xCT 之间的相互作用关系;构建xCT基因敲除小鼠模型,Pg口腔灌胃4周后剥离小鼠食管组织,利用 RNAscope???? 原位杂交检测小鼠食管黏膜 Pg的载菌量;采用qRT-PCR、Westernblot和还原型/氧化型谷胱甘肽试剂盒测定 Pg感染对食管癌细胞内谷氨酰胺代谢及其合成酶表达的影响。结果 全基因组筛选测序分析及细胞活力测定结果表明,xCT能够增强 Pg在胞内的定殖从而促进食管癌细胞增殖;免疫共沉淀、NanoBiT???? 实验和免疫细胞荧光实验结果表明,xCT与 Pg鞭毛蛋白 FimA可直接结合并相互作用;体内实验结果表明,xCT基因敲除小鼠食管上皮中Pg载菌量显著低于野生型小鼠(P<0.01);qRT-PCR、Westernblot和还原型/氧化型谷胱甘肽测定发现,感染Pg后食管癌细胞的谷氨酰胺合成酶(glutaminase-1,GLS1)以及还原型/氧化型谷胱甘肽比率显著高于未感染组,差异具有统计学意义(均P<0.01)。结论 xCT 是 Pg入侵食管癌细胞的重要受体分子之一;Pg入胞后能显著增强肿瘤细胞谷氨酰胺代谢。上述研究为食管癌的病因学和防治策略提供了理论依据。

来源：2022年第4期

《华中科技大学学报(医学版)》期刊编辑部

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