华中科技大学学报(医学版)

作者：金鑫,申杰,谭苗,欧虹灵,司渊

单位：湖北医药学院 1基础医学院 2胚胎干细胞研究湖北省重点实验室,十堰 442000

关键词：重楼皂苷 D, 多形性胶质母细胞瘤, Caspase-3, Hippo通路,

基金：国家自然科学基 金 资 助 项 目 (No.81802387);湖 北 省 自 然 科 学 基 金 创 新 群 体 项 目 (No.2021CFA009);湖 北 省 教 育 科 学 规 划 课 题 (No.2021GB101);大学生创新创业训练项目(No.202110929001,No.202210929007,No.202210929009)

摘要:目的 探讨重楼皂苷 D(polyphyllinD,PPD)抑制多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme,GBM)恶性生物学行为的分子机制。方法 使用的细胞模型为 DBTRG-05MG(DBTRG)和 A172细胞株。将 PPD 处理后的细胞,通过 MTT实验、实时无标记细胞分析技术(real-timecellularanalysis,RTCA)和集落形成实验检测 PPD 对细胞存活能力的影响;流式细胞术、DAPI染色、Westernblot检测 PPD 对细胞凋亡的影响;Transwell细胞侵袭实验和 RTCA 测定PPD对细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验和高内涵成像分析系统测定PPD对细胞迁移能力的影响;Westernblot测定PPD所导致的 Hippo信号通路相关蛋白质的表达以及蛋白质的磷酸化水平的变化;通过 Caspase-3抑制剂(Z-DEVDFMK,Z-DEVD)与 PPD共处理明确 Caspase-3对 MST1的激活作用;利用分子对接研究 PPD 与 Caspase-3在三维空间的相互作用;通过靶点稳定性药物亲和反应实验明确 PPD 与 Caspase-3的直接结合。结果 PPD 对 GBM 细胞的增殖具有显著的抑制能力。PPD能够诱导 GBM 细胞发生凋亡。PPD 处理组的 GBM 细胞侵袭、迁移能力显著下降。PPD能够下调 YAP蛋白及其下游靶基因 Cyr61、c-Myc的转录,促进 YAP上游信号分子 LATS1、MST1的磷酸化,表明 PPD能够激活 GBM 细胞中的 Hippo信号通路。Z-DEVD 能够拮抗 PPD 对 MST1的磷酸化,表明 PPD 通过激活 Caspase-3进而激活 Hippo信号通路。分子对接模拟发现 PPD能够在 C-末端区域与 Caspase-3结合;基于靶点稳定性的药物亲和反应实验表明 PPD阻碍了蛋白酶pronase对 Caspase-3的水解作用,表明PPD与 Caspase-3具有直接结合作用。结论PPD通过靶向 Caspase-3激活 Hippo信号通路抑制 GBM 细胞增殖、侵袭和迁移并诱导凋亡。

来源：2023年第3期

《华中科技大学学报(医学版)》期刊编辑部

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