华中科技大学学报(医学版)

作者：闫先航,钱正韬,姚春芳,周小明

单位：1江苏大学医学院,镇江 2120132江苏省常熟市第一人民医院中心实验室,常熟市医学检验所分子微生物实验室,常熟 2155003苏州大学附属儿童医院病理科,苏州 215100

关键词：mTORC1, TRiC/CCT复合体, 蛋白质折叠, 分子伴侣,

基金：国家自然科学基金资助项目(No.81571546)

摘要:目的 探讨TRiC/CCT复合体(TCP-1ringcomplex/chaperonincontainingTCP-1)与mTOR复合体1 (mTORC1)之间可能的相互调控机制。方法 采用免疫共沉淀技术和Westernblot技术探究TRiC/CCT复合体与mTORC1之间的相互作用;使用雷帕霉素抑制mTORC1活性后,制备可溶性及不溶性细胞蛋白样本,比较受CCT辅助折叠的蛋白表达水平变化;通过非变性凝胶电泳技术观察TRiC/CCT复合体的变化,探究mTORC1对TRiC/CCT复合体完整性的影响;利用慢病毒介导的shRNA静默HEK-293T细胞中的CCT2或CCT5基因,研究TRiC/CCT复合体对mTORC1关键组分表达及下游底物磷酸化水平的影响。结果 免疫共沉淀实验证实TRiC/CCT复合体各亚基与mTORC1均存在相互作用;雷帕霉素抑制mTORC1活性后,β-actin、β-Tubulin及STAT3不溶性蛋白表达量无明显增加,且在非变性电泳凝胶中复合体分子大小无明显改变,证明mTORC1对TRiC/CCT复合体的形成不存在调控作用;在HEK-293T中静默CCT2或CCT5后,mTOR、Raptor、mLST8蛋白表达水平降低,且磷酸化的p70S6K及Akt水平降低,证实TRiC/CCT复合体对mTORC1及下游分子具有调控作用。结论 TRiC/CCT复合体通过调控mTORC1各组分的蛋白表达水平,进而影响其下游底物的磷酸化水平及活性状态。

来源：2025年第1期

《华中科技大学学报(医学版)》期刊编辑部

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