华中科技大学学报(医学版)

作者：李洋,刘磊,林家茂

单位：山东第一医科大学附属肿瘤医院 1山东省精准肿瘤学重点实验室 3肿瘤内科,济南 2501172山东省济宁医学院中西医结合学院,济宁 272067

关键词：肿瘤干细胞, 奥希替尼, 耐药, 玄丹清金颗粒,

基金：国家自然科学基金资助项目(No.81904186);山东省自然科学基金创新发展联合基金项目(No.ZR2023LZY007);山东省中医药重点学科建设项目(No.鲁卫中医药科教字[2022]4号)

摘要:目的 探讨玄丹清金颗粒对奥希替尼耐药的人肺腺癌PC9/OR细胞的逆转作用及机制。方法 构建奥希替尼耐药的人肺腺癌细胞PC9/OR,CCK-8检测不同浓度奥希替尼对PC9和PC9/OR的增殖能力的影响及不同梯度浓度玄丹清金颗粒含药血清对PC9/OR增殖的影响,Westernblot和qRT-PCR鉴定PC9/OR耐药性及肿瘤干细胞特性,软琼脂克隆形成实验检测细胞成球能力,侧群分选测定肿瘤干细胞比例,应用转录组测序筛选肿瘤干细胞相关调控通路并利用Westernblot反向验证。结果 与PC9相比,PC9/OR的奥希替尼IC50值显著升高,奥希替尼对p-EGFR、p-ERK和p-RPS6的抑制被明显削弱,与干细胞特性相关的调控分子亦呈不同程度上调。CCK-8检测提示以培养液稀释的40%及以下浓度含药血清可排除大鼠血清的细胞毒性干扰。CCK-8及克隆形成实验提示奥希替尼与玄丹清金颗粒含药血清的联合组PC9/OR细胞存活率及成球能力显著下降。侧群分选证实联合组干细胞比例显著下调。RNA-seq发现与肿瘤干细胞调节相关的PTCH2、SMO、GLI1、GLI2、GLI3发生显著变化。反证实验发现联合组加入激活剂(purmorphamine,PM)后,克隆形成及细胞存活率升高,OCT4、NANOG、SOX2、SHH、SMO、GLI1、GLI2上调,PTCH2下调。结论 玄丹清金颗粒能够通过抑制肿瘤干细胞特性逆转PC9/OR耐药,具体机制与调控Hh-Ptch/Smo-Gli调节轴相关。

来源：2025年第1期

《华中科技大学学报(医学版)》期刊编辑部

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